紫花苜蓿草质优良、营养丰富(富含蛋白质、矿物质、维生素以及多种未知生长和繁殖因子等)，饲喂动物不仅有利于促进动物的生长、繁殖性能，而且苜蓿中的活性物质还有增强血清抗氧化性、降低丙二醛(MDA)含量以及预防心血管疾病等作用^[1]。畜牧业生产中充分利用这一资源以节约饲料成本，已成为养殖增效的主要途径之一。然而，苜蓿纤维硬而粗糙，适口性较差，还含有不利于畜禽生长的皂苷等化合物，限制其充分利用。利用发酵技术，通过益生微生物的降解作用，使多糖、蛋白质和脂肪等大分子物质分解、转化成可吸收利用的有机酸、可溶性多肽等小分子物质，形成营养丰富、适口性好、活菌含量高的生物饲料，并产生大量消化酶、维生素等，抑制或杀灭有害菌，有利于增强畜禽免疫力。目前国内外有关苜蓿草粉以及发酵产品对鸡的生产性能研究报道较多^[2, 3, 4]，但在鹅饲养中应用的研究报道较少。Rainbird等^[5]报道，鹅在4周龄前，饲粮中添加15%苜蓿草粉对其生长、屠宰性能无显著影响，但减少胴体脂肪的沉积。Yu等^[6]认为，在鹅饲粮中添加20%苜蓿草粉也不影响生长，其原因是鹅盲肠内有淀粉酶和纤维素水解酶。可见，在饲粮中搭配一定比例的苜蓿草粉，既能为禽的生长提供部分营养需要，也能节约饲粮。鉴于此，本试验拟采用不同水平的苜蓿草粉或发酵苜蓿草粉，设计出不同粗纤维水平的饲粮，研究其对狮头鹅的生长性能、血清抗氧化酶及消化酶活性的影响，探索鹅饲粮中苜蓿草粉适宜添加量，为更好利用苜蓿草粉资源提供科学依据。

苜蓿草粉：由河南工业大学绿化科提供。紫花苜蓿初花期刈割，自然干燥加工而成。苜蓿草粉营养成分含量为：干物质86.25％，粗蛋白质19.20%，粗脂肪2.60%，粗纤维22.60%；无氮浸出物33.54％，粗灰分7.78％，钙2.05％，总磷0.44％。

发酵苜蓿草粉：将刈割的紫花苜蓿用铡刀切成2 mm左右长的草段，将茎叶混合均匀，按照刘晗璐等^[7]介绍的方法发酵6 d。发酵苜蓿草粉营养成分含量为：干物质84.21％，粗蛋白质22.18%，粗脂肪2.84%，粗纤维21.23%，无氮浸出物34.62％，粗灰分7.94％，钙2.09％，总磷0.48％。

试验饲粮组成参考NRC(1994)肉鹅营养需要配制而成，其组成及营养水平见表1。以玉米为主要碳水化合物，向日葵仁饼、豆粕为主要蛋白质源，分别补充发酵和未发酵的苜蓿草粉，设计9种近似等氮(粗蛋白质约为18%)等能(代谢能约为11 MJ/kg)的不同粗纤维水平饲粮。对照组雏鹅饲喂不添加苜蓿草粉饲粮，试验组分别饲喂添加5%、10%、15%、20%的苜蓿草粉和5%、10%、15%、20%的发酵苜蓿草粉试验饲粮。饲料原料充分混匀，经QRLS-150型饲料机制成直径为3.0 mm的颗粒，自然风干后装袋封装，4 ℃贮藏备用。

表1 试验饲粮组成及营养水平(风干基础)Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis)

选取同期出雏的1日龄鹅162只(郑州市售狮头鹅苗)，随机分为9个组，每组设3个重复，每个重复6只鹅，雌雄各占1/2。试验期为35 d，全期舍饲和自然光照。试验期间鹅自由采食和饮水；温度：前3周分别为28～30 ℃、26～27 ℃、24～25 ℃，3周后逐渐降到常温；平均相对湿度65%。

35日龄时，分别以重复为单位对试验鹅进行空腹称重，计算平均日增重(ADG)；记录每日饲料消耗，计算平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)。

生长试验结束后，每组的重复中随机抽取2雌2雄鹅共4只，翅静脉采血5 mL，静置片刻后3 500 r/min离心10 min吸取血清，使用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒，按说明测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及MDA含量。

取屠宰鹅分离的胃、十二指肠内容物0.3 g，按9 ∶ 1加匀浆介质，匀浆、离心(2 500 r/min)10 min，取上清液测定胃蛋白酶和肠消化酶活性。由南京建成生物工程研究所生产的试剂盒测定。蛋白酶活性单位定义：每毫克胃内容物37 ℃每分钟分解蛋白质生成1 μg氨基酸；肠淀粉酶活性单位定义：底物中每毫克蛋白质在37 ℃与底物作用30 min，水解10 mg淀粉定义为1个淀粉酶活单位。肠脂肪酶活性单位定义：在42 ℃、pH 7.5条件下，脂肪酶水解脂肪，1 min消耗1 μmol底物为1个酶活性单位。取胰腺0.4 g，加9倍匀浆液匀浆，离心取上清液，测消化酶活性，方法同上。

试验数据以平均值±标准差表示。采用SPSS Statistics 17.0对数据进行方差分析和线性、二次拟合，若差异显著，用Duncan氏法多重比较，差异显著水平为P＜0.05。应用二次多项式拟合苜蓿草粉添加水平与平均日增重之间的相关关系，确定适宜添加水平。

由表2可知，10%发酵苜蓿草粉组平均日增重最高(47.79 g)，较对照组提高了19.48%(P＜0.05)，但与5%发酵苜蓿草粉组无显著差异(P>0.05)；平均日采食量变化和平均日增重变化类似，且二者变化无显著线性相关(P>0.05)，有二次显著相关(P＜0.05)，二者都随苜蓿草粉添加量增大而趋于降低。饲粮添加苜蓿草粉或发酵苜蓿草粉对平均日增重无显著交互作用(P>0.05)，对平 均日采食量和料重比无显著交互作用(P>0.05)。

表2 苜蓿草粉对鹅生长性能的影响Table 2 Effects of alfalfa meal on growth performance of geese (n=3)

由表3可知，饲粮中添加苜蓿草粉对鹅血清GSH-Px、SOD、CAT活性和MDA含量有显著交互影响(P<0.05)；除血清MDA含量与苜蓿草粉无显著线性相关(P=0.101)外，其他参数都与苜蓿草粉呈显著线性相关(P<0.05)。发酵苜蓿草粉与 SOD活性、苜蓿草粉与MDA含量呈显著二次相 关(P<0.05)。血清抗氧化物酶活性随苜蓿草粉水平增加而增加，5%和10%苜蓿草粉组、5%发酵苜蓿草粉组与对照组差异不显著(P>0.05)，其他各组与对照组差异显著(P<0.05)；血清MDA含量变化随苜蓿草粉或发酵苜蓿草粉水平增加先降后增，除添加5%苜蓿草粉组外各组均显著低于对照组(P<0.05)。

表3 苜蓿草粉对鹅血清抗氧化物酶活性及MDA含量的影响Table 3 Effects of alfalfa meal on serum antioxidant enzyme activity and MDA content of geese (n=3)

由表4可知，饲粮添加苜蓿草粉对胃蛋白酶、胰脂肪酶、十二指肠蛋白酶和脂肪酶活性无显著影响(P>0.05)。饲粮添加苜蓿草粉或发酵苜蓿草粉对胰蛋白酶、胰淀粉酶活性呈显著二次和交互影响(P<0.05)。10%苜蓿草粉组胃蛋白酶、胰淀粉酶、十二指肠淀粉酶活性显著高于对照组(P<0.05)，但与5%苜蓿草粉组无显著差异(P>0.05)。10%发酵苜蓿草粉组胰蛋白酶和胰淀粉酶活性最高，分别为1 427.69和10 857.68 U/mg；十二指肠淀粉酶活性与之类似变化(293.27和40.47 U/mg)。

表4 苜蓿草粉对鹅消化酶活性的影响Table 4 Effects of alfalfa meal on digestive enzymes activity of geese (n=3)

苜蓿因其蛋白质含量高，富含动物所需的多种矿物质、维生素、多糖，成为畜、禽、水产养殖中补充蛋白质和粗纤维的重要原料之一^[3]。鉴于畜禽的品种差异以及同一品种的不同生长阶段消化道发育不同，对苜蓿利用方面也存在较大差异，从而得到不同的养殖效果。史莹华等^[8]给15日龄四川白鹅饲喂20%苜蓿草粉，结果显示生长性能显著提高，而饲喂30%苜蓿草粉则生长性能降低；Rainbird等^[5]在鹅饲粮中添加草粉的试验表明，4周龄之前添加15%的苜蓿草粉和5～6周龄饲喂30%的苜蓿草粉，对鹅的生长、屠宰性能无显著影响。本试验结果显示，饲粮添加5%～10%的苜蓿草粉能够显著提高的鹅的平均日增重和平均日采食量，说明适当补充苜蓿草粉对鹅具有促生长作用，然而过高补充则对鹅的生长不利。研究表明，苜蓿异黄酮可通过上调动物的生长激素(GH)或与肝脏内的GH受体结合，促使胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的含量上升^[9]或促进雄性激素分泌^[10]，直接或间接减少氨基酸的氧化，从而增强蛋白质的合成，促进动物的生长；然而，高比例添加苜蓿草粉使饲粮中苜蓿皂苷水平提高，由于该物质味苦，适口性差，能降低鹅的采食量，使生长受到影响^[11]；此外，苜蓿皂苷对鹅的消化道菌群产生抑制作用，会引起饲粮纤维消化不良，使鹅饥饿感不强，采食量降低，生长抑制^[12]。本试验结果也证实随补充水平增加，鹅的采食量趋于减少。鹅是草食动物，对饲粮粗纤维有较好的利用能力，但高水平粗纤维对于鹅的生长也产生不利影响。这主要是由于雏鹅消化机能发育不完善，盲目地提高饲粮中粗纤维水平，会加快胃排空速度，影响了雏鹅对营养物质的消化吸收，使料重比增加。本试验结果表明，鹅饲粮在粗纤维含量为6%～7%较为适宜，这和Yu等^[6]研究结果一致。

添加发酵苜蓿对于鹅的生长性能优于未发酵苜蓿，这可能与枯草芽孢杆菌有关。谭荣炳^[13]研究表明，鹅饲粮中添加枯草芽孢杆菌制剂显著提高14和28日龄鹅的平均体重；由于枯草芽孢杆菌的大量繁殖，使发酵饲粮兼有益生菌添加剂的特点，不但能维持和调节鹅机体的微生态平衡，增强免疫，减少有害菌的危害，还可以激活机体自身的酶活，从而提高生长性能。另外，发酵苜蓿草粉还有效地降低苜蓿皂苷等抗营养因子，同时也提高了苜蓿草粉的粗蛋白质和小肽含量，改善了苜蓿草粉的营养价值和适口性，更有利于鹅的生长，这与朱宪章等^[14]的报道一致。

研究表明，苜蓿草粉含有皂甙类、多糖类、胡萝卜素、异黄酮类、硒、维生素C和维生素E等活性物质，这些生物活性物质对动物机体的抗氧化作用都有一定的促进作用^[15]。张艺^[15]研究苜蓿叶蛋白质对成年小鼠抗氧化性能的结果表明：苜蓿叶蛋白质可提高小鼠GSH-Px、SOD活性，降低MDA含量。本试验表明，苜蓿草粉饲粮促进鹅抗氧化系统的主要酶活性；除添加5%苜蓿草粉组与对照组无显著差异外，其他试验组显著降低了雏鹅血清MDA含量，改善了鹅抗氧化系统，这也与史莹华等^[8]报道结果一致。发酵苜蓿草粉含有比普通苜蓿草粉活性更高的多糖、维生素、异黄酮，以及更丰富的小肽，二者相互作用，更能提高机体的抗氧化能力^[16]。本试验结果表明，补充发酵苜蓿草粉，鹅血清中的抗氧化物酶活性均高于苜蓿草粉组，血清MDA含量低于苜蓿草粉组，说明发酵苜蓿草粉能更好地提高鹅的抗氧化能力。朱宪章等^[14]研究发现，发酵饲粮可增强朗德鹅的心脏钠钾ATP酶活性，降低羟自由基对细胞质膜的损伤，改善机体细胞膜的结构和功能，进一步说明发酵饲粮提高机体抗氧化能力。此外，Rohrdanz等^[16]研究大豆异黄酮对大鼠CAT活性发现，大豆异黄酮能激活大鼠CAT的启动子，促进CAT mRNA的表达，从而达到提高CAT活性、增强机体抗氧化能力的目的；Jiang等^[17]研究也证实，异黄酮可以减少动物体内的MDA含量。对于苜蓿异黄酮是否能增强鹅抗氧化能力具有类似功能，尚需进一步研究。

动物消化酶的活性与浓度高低直接影响对动物饲粮的消化率，而消化酶活性受多种环境因素的影响，其中主要有动物品种、动物年龄、饲粮组成、消化道部位、外源酶制剂以及神经和体液因素等^[18]。本试验研究结果显示，鹅摄食6.0%～8.0%纤维水平的苜蓿草粉或发酵苜蓿草粉饲粮后，胃蛋白酶、胰腺和十二指肠的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶活性显著提高。这与Thatcher等^[19]的研究结果相同。Thatcher等^[19]认为，苜蓿粉能提高脂肪酶和蛋白酶的活性，这可能是由于纤维源选择的不同造成的。而Lowa^[20]报道指出，提高饲粮中的纤维含量，能够促进唾液、胃液、胃酸和胃蛋白酶的分泌，提高胰液的分泌量。Vahouny等^[21]对饲粮粗纤维水平的体外试验的研究中发现，饲粮纤维有提高胰脏消化酶活性的作用。Calvert等^[3]利用4种纤维源饲粮饲喂小白鼠发现，苜蓿草粉极显著提高了小白鼠胰脂肪酶和胰蛋白酶的活性，而另外几种纤维源对提高消化酶活性作用不显著。然而本试验研究发现，高含量的苜蓿草粉或发酵苜蓿草粉又不同程度降低了消化酶活性，这可能是因为纤维素与酶特异性的结合或者纤维中含有特异性酶抑制剂造成的^[22]，或者由于苜蓿皂苷含量也相应增加造成的。高皂苷水平会降低肠细胞内的合成与代谢功能，这可能也是造成消化酶活性较低的原因^[23]。

在鹅饲粮中添加一定量的苜蓿草粉或发酵苜蓿草粉可以促进其生长，提高抗氧化酶和消化酶活性，添加发酵苜蓿草粉效果更好。