罗有文 王 恬 林贵娟
摘 要 试验研究了酪蛋白的胃蛋白酶解物对小鼠生长和免疫功能的影响。选用28日龄纯昆明系小白鼠48只，随机分成3组。试验Ⅰ组、Ⅱ组和对照组分别胃饲酪蛋白酶解物溶液、酪蛋白溶液和生理盐水。胃饲2周后将小鼠采血致死。结果显示，Ⅰ组胃重显著高于Ⅱ组（P<0.05），小肠重显著高于对照组（P<0.05），且体增重、胃蛋白酶活性有增高趋势；但各组胃和小肠组织蛋白含量、小肠乳糖酶、麦芽糖酶活性无显著差异。Ⅰ组胸腺指数和血浆碱性磷酸酶（AKP）活性均显著高于对照组（P<0.05）。但各组脾脏指数无显著差异。试验结果表明：酪蛋白酶解物具有促进小鼠胃肠生长，提高小鼠免疫功能的作用。
关键词 酪蛋白酶解物；小鼠；生长；免疫功能
中图分类号 S852.4
Effects of Hydrolyzed Casein on Growth and Immune Function of Mice
Luo Youwen， Wang Tian， Lin Guijuan
Abstract Forty-eight white mice of Kunming strain(28 days) were selected to examine the effects of hydrolyzed casein on growth and immune function. All the selected mice were divided into three groups at random. GroupⅠwas fed hydrolyzed casein solution, GroupⅡwas fed casein solution, Control group was fed physiological brine. After two weeks collected blood to make the mice death. Results showed: the weight of stomach in groupⅠwas higher than groupⅡ, at significant level(P<0.05). The weight of small intestine in groupⅠwas higher than control group, at significant level(P<0.05). The increased body weight, activity of pepsin in groupⅠhad the tendency to increase. No significant differences in the protein contents of stomach and small intestine, lactase and maltase of small intestine were observed among the groups. The index of thymus and activity of plasma AKP in groupⅠwas higher than control group, at significant level(P<0.05). But there were no differences in the index of spleen among the groups. The results showed that hydrolyzed casein can promote the growth of stomach and small intestine, enhance the immune function of mice.
Key words hydrolyzed casein；mice；growth；immune function
酪蛋白中蕴含着丰富的生物活性肽，这些肽在体内或体外消化酶的作用下可被释放出来，表现其独特的生理功能。试验证明酪蛋白酶解产物能提高小鼠的体重；促进雏鸡组织蛋白的合成，降低血浆胆固醇含量；在母鼠饲粮中添加酪蛋白酶解产物能减缓病毒引起的IUGR；临床上，在人乳中补加酪蛋白酶解产物能使IUGR婴儿的氮吸收、尿氮排出以及氮沉积增加，血浆中必需氨基酸浓度、尿素氮和总蛋白含量增加。以上研究提示，酪蛋白酶解物中可能含有对动物生长和免疫功能具有促进作用的物质。本试验通过体外酶解的方法，将酪蛋白分解为小分子肽类物质，以小鼠为研究对象，测定相关指标，研究酪蛋白酶解物对小鼠生长和免疫功能的影响。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 主要试剂
酪蛋白钠，（荷兰产，上海工合食疗研制所分装，其中蛋白质88%、脂肪1.5%、钠1.2%）；胃蛋白酶，Amresco,Pepsin 1：3 000，Porcine Source。
1.1.2 酪蛋白的酶解处理
称取酪蛋白钠7.5g，在磁力搅拌机上溶于300ml双蒸水中（用1N NaOH助溶），溶解完全后用1N HCl调节pH=1.4，定容至500ml，终浓度为15mg/ml。称取胃蛋白酶0.25g，在磁力搅拌机上逐渐加到配好的酪蛋白溶液中，混匀，于37℃中消化90min，用10N NaOH终止反应，调节pH=7.0，于70℃中放置15min。经3 500r/min离心15min，取上清液分装密封。
1.2 动物分组与样本采集
纯昆明系小鼠（2±2）g48只，雌雄各半，按常规饲养3d后随机分成3组，每组16只。各组在饲喂常规日粮的基础上以0.5ml/只·d的胃饲量，试验Ⅰ组胃饲酪蛋白酶解物溶液，试验Ⅱ组胃饲酪蛋白溶液，对照组胃饲生理盐水。连续胃饲二周后禁食12h，摘眼球采血然后脱臼致死。收集血液，保存于4℃中用于生化指标测定。小鼠处死后剖开腹腔，迅速取出胸腺、脾脏、胃、小肠，去除胃、小肠中的食糜后称重，于-20℃中保存备用。
1.3 测定指标与方法
胸腺指数（mg/g）=胸腺重/体重
脾脏指数（mg/g）=脾脏重/体重
胃、小肠蛋白含量测定采用Lowry等改良的福林-酚试剂法[1]。
胃内蛋白酶水解活性参照Anson的蛋白酶活性测定步骤[2]，采用其针对胃蛋白酶的改进法—DAB9法[3]进行测定。
小肠乳糖酶、麦芽糖酶和血浆碱性磷酸酶（AKP）用常规分光光度法测定。
1.4 数据统计分析
试验数据采用SPSS11.0软件统计，用单因子方差分析（Ony-way ANOVA, LSD）进行差异显著性检验，结果以平均数±标准差（X±SD）表示。
2 结果与分析
2.1 酪蛋白酶解物对小鼠体增重、胃重、小肠重、胸腺重、脾脏重及胸腺指数、脾脏指数的影响

由表1可见，Ⅰ组的胃重为0.339g，极显著高于Ⅱ组的0.287g（P<0.01），Ⅰ组小肠重比对照组提高了15%，差异显著(P<0.05)。Ⅰ组胸腺重、脾脏重、胸腺指数均显著高于对照组（P<0.05），且体增重不同程度大于Ⅱ组和对照组，但差异不显著（P>0.05）。各组脾脏指数无显著差异(P>0.05)。
2.2 酪蛋白酶解物对小鼠胃和小肠组织蛋白含量、胃蛋白酶活性、小肠乳糖酶、麦芽糖酶活性的影响
各组之间胃和小肠蛋白含量、小肠乳糖酶、麦芽糖酶活性均无显著差异(P>0.05)。但Ⅰ组胃蛋白酶水解活性有增高趋势。

2.3 酪蛋白酶解物对小鼠血浆AKP活性的影响
各组血浆AKP活性分别为试验Ⅰ组2.71±1.44U/g tissue，试验Ⅱ组2.91±1.54U/g tissue，对照组1.49±0.84BU/g tissue。Ⅰ组的血浆AKP活性极显著高于对照组(P<0.01)。
3 讨论
3.1 酪蛋白酶解物对小鼠生长的影响
酪蛋白含有丰富的必需氨基酸和钙、磷，其氨基酸序列中隐藏着大量具有独特生理作用的肽片段（主要是酪啡肽），这些肽可在消化酶的作用下释放出来，表现其生物学功能[4]。试验证明酪蛋白酶解物能够促进小肠上皮细胞增殖[5]，酪蛋白酶解产物中肽分子量的分布是促进乳酸球菌生长的主要因素[6]。郑春田（1997）报道，用胰蛋白酶和靡蛋白酶对配方乳进行酶解处理后，可以显著提高小肠前段、后段和整段小肠内容物中乳糖酶的比活性和总活性。以上文献提示，酪蛋白酶解物中的某些肽类可能与动物的生长有关，它们对动物的生长具有促进作用。本试验结果亦表明，酪蛋白酶解物能明显促进小鼠胃和小肠的生长，且能使小鼠体增重和胃蛋白酶活性有增高趋势。
3.2 酪蛋白酶解物对小鼠免疫功能的影响
免疫是动物机体对自身和非自身的识别，并清除大分子物质，从而保持机体内外环境平衡的一种生理反应。酪蛋白的酶解产物之一——免疫活性肽具有多方面的生理功能。它不仅能够增强机体的免疫力，在生物体内起重要的免疫调节作用，而且还刺激机体淋巴细胞的增殖和增强巨噬细胞的吞噬能力，提高机体对外界病原物质的抵抗能力。Jolles等（1981）首先报道，人乳的胃蛋白酶提取物有调节免疫的作用[7]。Migliore-samoure认为酪啡肽对新生儿的免疫系统有刺激作用[8]。
本试验通过对小鼠几项免疫指标的测定分析，发现酪蛋白酶解物对提高小鼠的胸腺重、脾脏重、胸腺指数和血浆AKP活性具有显著作用。周文华等试验证明，酪蛋白经酶解后所释放的一类小肽（可能也是免疫调节肽）对大鼠的免疫活性具有一定促进作用[9]。在体外条件下，β-酪蛋白的某些残基片段能刺激鼠腹膜巨噬细胞吞噬绵羊红细胞[10]。据此可推测酪蛋白酶解物可以增强动物的免疫功能。
参考文献
1 Lowry O H, Rosebrough N J, Farr A L, et al. Protein measurement with the Follin phenol reagent[J]. J. Biol. Chem., 1951, 193: 265~275
2 G·G·吉尔鲍特著. 缪辉南，陈石根译. 酶法分析手册[M].上海：上海科学技术出版社，1983.79~82
3 施特马赫尔著. 钱嘉渊译. 酶的测定方法[M]. 北京：中国轻工业出版社，1992.229~231
4 马玉敏，王恬（指导老师）. 胰岛素、IGF-1和酶解初乳对离体犊牛小肠上皮细胞增殖和功能发育的影响. 南京农业大学硕士论文，2000
5 於朝梅，王恬（指导老师）. 酪蛋白及配方乳酶解物对离体犊牛小肠上皮细胞增殖和功能发育的影响. 南京农业大学硕士论文, 2002
6 Stgelais D, Roy D, et al. Growth of nonproteolytic Lactococcus lactis in culture medium supplemented with different casein hydrolyzates[J]. Dairy Sci., 1993, 76:327~337
7 Jolles P, Parker F, et al. Immunostimulating substances from human casein[J]. Immunopharmocol, 1981, 3:363~367
8 Migliore D, Floc H F, Jolles P. Biologically active casein peptides implicated in immunomodulation[J]. Dairy Research, 1989, 56:357~362
9 周文华等. 饲喂β-酪啡肽对大鼠免疫功能影响的研究[J]. 畜牧与兽医，2002，34（2）：13~15
10 Kayser H, Meisel H. Stimulation of human peripheral blood lymphocytes by bioactive peptides from bovine milk protein[J]. FEBS Letters, 1996, 383:18~20
罗有文，南京农业大学动物科技学院，在读硕士研究生，210095，江苏南京。
王恬、林贵娟，单位及通讯地址同第一作者。
收稿日期：2005-01-10