贾久满 李成会 王学法 吝祥根
摘 要 为了研究用蚯蚓制备的复合氨基酸小肽螯合锌在蛋鸡生产上的应用效果，在某蛋鸡场取260只蛋鸡，随机分为2组，每组130只，试验前两组蛋鸡的生产性能差异不显著。试验开始后对照组采用由ZnSO4·H2O配制的3％蛋鸡预混料，试验组采用由蚯蚓复合氨基酸小肽螯合锌配制的3％蛋鸡预混料，试验期为7周。结果显示，试验组与对照组相比，产蛋率无显著差异（P>0.05）；平均蛋重提高5.91 g，提高了8.52％，差异极显著(P<0.01)；每只鸡每天的产蛋量提高了4.14 g，提高7.28％，差异显著（P<0.05）；蛋黄胆固醇含量降低了1.26 mg/g，降低15.35％，差异显著（P<0.05）；蛋黄颜色值升高了0.86，升高14.58％，差异显著（P<0.05）。因此认为，利用蚯蚓制备的复合氨基酸小肽螯合锌可以提高蛋鸡的生产性能，并对提高蛋品质有一定的帮助。
关键词 蚯蚓；复合氨基酸；小肽；螯合锌；蛋鸡；生产性能
中图分类号 S816.32
氨基酸螯合微量元素是近些年发展起来的新型微量元素饲料添加剂，如赖氨酸锌、甘氨酸铜、蛋氨酸铁等，与无机微量元素相比，具有稳定性好、抗干扰力强、容易吸收、生物利用率高等优点，其生物学效价为无机盐类添加剂的2～3倍，并具有补充微量元素和氨基酸的双重作用。但由于价格比较高，限制了氨基酸螯合微量元素添加剂在生产上的应用。
蚯蚓蛋白质含量很高，约占鲜重的8%~10%，干重的56%~66%,最高可达70%,是很好的动物性饲料。刘波等(2006)[1]研究表明，在最佳酶解条件下，蚯蚓酶解产物中氨基酸残基数在2以下、相对分子量在320以下的小肽和氨基酸混合物含量达82％。贾久满等(2009)[2]利用干蚯蚓制备的水解液中总氨基酸含量为144.91 mg/ml，游离氨基酸含量为78.97 mg/ml，游离氨基酸占总氨基酸含量的54.5％，利用蚯蚓开发复合氨基酸小肽螯合微量元素添加剂将有广阔的应用前景。
1 材料与方法
1.1 蚯蚓复合氨基酸小肽螯合锌的制备
取干蚯蚓15 kg，加45 L蒸馏水，制得蚯蚓水解液。在蚯蚓水解液中加入3 kg ZnSO4·H2O进行螯合反应，然后加入20 kg菜粕粉均匀混合，110 ℃烘干后粉碎，制得蚯蚓复合氨基酸小肽螯合锌，备用。
1.2 蛋鸡预混料的制备
对照组的预混料中添加ZnSO4·H2O，试验组预混料中添加蚯蚓复合氨基酸小肽螯合锌，制备3％蛋鸡预混料，其营养成分见表1。
1.3 试验分组与试验记录
在唐山市丰润区某蛋鸡场随机选取55周龄海兰褐蛋鸡260只，分为2组，分别为对照组和试验组，每组130只。预试期为1周，两组均饲喂ZnSO4·H2O配制的3％蛋鸡预混料，试验开始后对照组采用由ZnSO4·H2O配制的3％蛋鸡预混料，试验组采用由蚯蚓复合氨基酸小肽螯合锌配制的3％蛋鸡预混料，试验期为7周，饲料配方及营养水平见表2。从预试期开始记录每组蛋鸡每天的存栏数、产蛋数、产蛋总重量等，直至63周试验结束，并在每周的最后一天在每组随机抽取鸡蛋10枚，用于蛋品质的检测。
1.4 试验方法
1.4.1 生产性能的测定
预试期生产性能的统计为换料前一周的试验数据的平均值，试验期生产性能的统计为试验结束前4周的试验数据的平均值。
1.4.1.1 产蛋率的计算：产蛋率为统计期内日产蛋量的平均值。
日产蛋率＝每天的产蛋总重量/每天的蛋鸡存栏数
1.4.1.2 平均蛋重的计算：平均蛋重为统计期内日平均蛋重的平均值。
日平均蛋重＝每天的产蛋总重量/每天的产蛋数
1.4.1.3 产蛋量的计算：产蛋量为所有存栏蛋鸡每只鸡每天平均产蛋的重量，即统计期内日产蛋量的平均值。
日产蛋量＝日平均蛋重×日产蛋率
1.4.2 蛋品质的测定
1.4.2.1 蛋黄胆固醇的测定
①随机取各组的样品鸡蛋，每组3枚，将鸡蛋煮熟，冷却后分离蛋黄与蛋清，蛋黄立即称重；②将每个蛋黄放入烧杯中捣碎，搅拌均匀；③准确称取混匀样品1.000 0 g（精确到小数点后4位）作为待测样品；④用甲醇：氯仿（2：1）混合溶液充分研磨提取至无明显颗粒为止，过滤到10 ml具塞刻度试管中，并补充稀释至10 ml刻度处，混匀，密封，放入4 ℃冰箱中静置过夜；⑤取试管中上清液30 μl加入总胆固醇试剂3 ml[总胆固醇试剂盒-CHO（酶法），北京北化康泰临床试剂有限公司]，37 ℃水浴10 min。同时用蒸馏水作空白管，用总胆固醇试剂盒中的标准品作标准管，在520 nm处，以空白管调零，读取各管吸光度；⑥计算蛋黄中总胆固醇含量，取其平均值。
1.4.2.2 蛋黄颜色的测定
罗氏比色扇法：随机取各组的样品鸡蛋，每组3枚，打开后观察蛋黄颜色，并与罗氏比色扇进行比对，确定蛋黄的比色值并记录，取其平均值。
2 结果与分析
2.1 预试期内生产性能的比较（见表3）
表3 预试期试验组与对照组生产性能的比较（x±s）
注：数据没有肩标表示差异不显著（P>0.05）；肩标*表示差异显著(P<0.05)；肩标**表示差异极显著(P<0.01)。下表同。
由表5和表6可以看出，在试验期内试验组与对照组相比，蛋黄胆固醇含量降低了1.26 mg/g，降低15.35％，差异显著（P<0.05）；蛋黄颜色值升高了0.86，升高14.58％，差异显著（P<0.05）。
3 讨论
3.1 复合氨基酸小肽螯合锌对蛋鸡产蛋性能的影响
微量元素螯合物因其独特的螯合环结构而具有与普通金属元素不同的吸收机制,位于五元环或六元环螯合物中心的金属元素可以通过小肠绒毛刷状缘,以氨基酸或肽的整体形式直接从肠粘膜吸收。金属离子由于在螯合物的中心而免遭一些理化因子的影响,能被有效吸收,所以其生物利用率高,并能减少不同金属元素之间的拮抗作用。而小肽与游离氨基酸在动物体内具有相互独立的吸收机制,动物体内存在着独立的小肽转运系统,小肽能完整地通过肠粘膜细胞而进入体循环,具有转运速度快、能耗低、效率高、载体不易饱和等优点。乔伟等(2006)[3]指出,小肽参与螯合时一般由末端氨基和邻近的肽键氧形成单环螯合结构,羧基由于空间位阻一般不参与螯合,即使参与也是以不太稳定的副键参与,所以这种螯合物保留有比较自由的羧基可以通过小肽转运系统吸收,小肽螯合物比氨基酸螯合物还要易于吸收。因此,复合氨基酸小肽螯合微量元素添加剂将具有容易吸收、生物学效价高,并能同时补充多种氨基酸、小肽和螯合微量元素等优点。
3.2 复合氨基酸小肽螯合锌对蛋品质的影响
汪国和等（2004）[4]报道，在蛋鸡日粮中添加大豆活性肽可大幅度地降低蛋黄中胆固醇的含量，其机理可能与大豆活性肽能阻碍肠道内胆固醇的再吸收，降低蛋黄胆固醇沉积，并能促使其排出体外有关。试验组与对照组相比蛋黄胆固醇含量降低，是否与蚯蚓水解过程中产生的肽类有关还有待于进一步研究。
王怀禹（2008）[5]认为棉籽饼、菜籽粕中含有的抗营养因子会影响蛋黄的着色，试验组与对照组相比蛋黄颜色升高，可能与蚯蚓水解液中含有生物活性物质对抗营养因子有一定的降解作用有关。
3.3 经济效益分析
配制30 kg预混料需要干蚯蚓0.75 kg，菜粕粉1 kg，按照干蚯蚓30 元/kg、菜粕粉2元/kg，加工费2元计算，需要增加投入26.5元。30 kg预混料可以配制蛋鸡日粮1 t，按每只鸡每天消耗130 g日粮，1 t日粮是7 865只鸡一天的饲喂量，可以增加鸡蛋产量32.56 kg，按鸡蛋价格6 元/kg计算，增加收入195.36元，投入产出比可达1：7.37，因此，在蛋鸡生产上应用复合氨基酸小肽螯合锌可以产生较好的经济效益。
4 结论
利用蚯蚓制备的复合氨基酸小肽螯合锌可以提高蛋鸡的生产性能，并对提高蛋品质有一定的帮助。
参考文献
[1] 刘波,谢骏,郑小平,等.蚯蚓蛋白酶解工艺及其产物分析[J].上海水产大学学报,2006,15(1):78-83.
[2] 贾久满,朱莲英,于慧颖,等.用蚯蚓制备复合氨基酸小肽螯合微量元素的研究[J].饲料研究,2009(7):23-27.
[3] 乔伟,周安国,王之盛,等.小肽促进微量元素吸收的研究进展[J]. 饲料工业,2006,27(17):12-14.
[4] 汪国和,张日俊.脂肪代谢调控及其在改善鸡蛋品质中的应用[J].饲料广角,2001(11):19-21.
[5] 王怀禹.影响蛋黄颜色的因素及调控措施[J].生产指导,2008(234):42-43.（编辑：刘敏跃，lm-y@tom.com）
贾久满，唐山师范学院生命科学系，副教授，063000，河北省唐山市建设北路156号。
李成会、吝祥根，单位及通讯地址同第一作者。
王学法，冀州市职教中心。
收稿日期：2009-11-02
★ 唐山市应用基础研究项目《蚯蚓体内生物活性物质的鉴定与应用》(07160214B)；唐山师范学院重点基金项目《蚯蚓饲料添加剂在蛋鸡生产上的应用研究》（09B03）
摘 要 为了研究用蚯蚓制备的复合氨基酸小肽螯合锌在蛋鸡生产上的应用效果，在某蛋鸡场取260只蛋鸡，随机分为2组，每组130只，试验前两组蛋鸡的生产性能差异不显著。试验开始后对照组采用由ZnSO4·H2O配制的3％蛋鸡预混料，试验组采用由蚯蚓复合氨基酸小肽螯合锌配制的3％蛋鸡预混料，试验期为7周。结果显示，试验组与对照组相比，产蛋率无显著差异（P>0.05）；平均蛋重提高5.91 g，提高了8.52％，差异极显著(P<0.01)；每只鸡每天的产蛋量提高了4.14 g，提高7.28％，差异显著（P<0.05）；蛋黄胆固醇含量降低了1.26 mg/g，降低15.35％，差异显著（P<0.05）；蛋黄颜色值升高了0.86，升高14.58％，差异显著（P<0.05）。因此认为，利用蚯蚓制备的复合氨基酸小肽螯合锌可以提高蛋鸡的生产性能，并对提高蛋品质有一定的帮助。
关键词 蚯蚓；复合氨基酸；小肽；螯合锌；蛋鸡；生产性能
中图分类号 S816.32
氨基酸螯合微量元素是近些年发展起来的新型微量元素饲料添加剂，如赖氨酸锌、甘氨酸铜、蛋氨酸铁等，与无机微量元素相比，具有稳定性好、抗干扰力强、容易吸收、生物利用率高等优点，其生物学效价为无机盐类添加剂的2～3倍，并具有补充微量元素和氨基酸的双重作用。但由于价格比较高，限制了氨基酸螯合微量元素添加剂在生产上的应用。
蚯蚓蛋白质含量很高，约占鲜重的8%~10%，干重的56%~66%,最高可达70%,是很好的动物性饲料。刘波等(2006)[1]研究表明，在最佳酶解条件下，蚯蚓酶解产物中氨基酸残基数在2以下、相对分子量在320以下的小肽和氨基酸混合物含量达82％。贾久满等(2009)[2]利用干蚯蚓制备的水解液中总氨基酸含量为144.91 mg/ml，游离氨基酸含量为78.97 mg/ml，游离氨基酸占总氨基酸含量的54.5％，利用蚯蚓开发复合氨基酸小肽螯合微量元素添加剂将有广阔的应用前景。
1 材料与方法
1.1 蚯蚓复合氨基酸小肽螯合锌的制备
取干蚯蚓15 kg，加45 L蒸馏水，制得蚯蚓水解液。在蚯蚓水解液中加入3 kg ZnSO4·H2O进行螯合反应，然后加入20 kg菜粕粉均匀混合，110 ℃烘干后粉碎，制得蚯蚓复合氨基酸小肽螯合锌，备用。
1.2 蛋鸡预混料的制备
对照组的预混料中添加ZnSO4·H2O，试验组预混料中添加蚯蚓复合氨基酸小肽螯合锌，制备3％蛋鸡预混料，其营养成分见表1。
1.3 试验分组与试验记录
在唐山市丰润区某蛋鸡场随机选取55周龄海兰褐蛋鸡260只，分为2组，分别为对照组和试验组，每组130只。预试期为1周，两组均饲喂ZnSO4·H2O配制的3％蛋鸡预混料，试验开始后对照组采用由ZnSO4·H2O配制的3％蛋鸡预混料，试验组采用由蚯蚓复合氨基酸小肽螯合锌配制的3％蛋鸡预混料，试验期为7周，饲料配方及营养水平见表2。从预试期开始记录每组蛋鸡每天的存栏数、产蛋数、产蛋总重量等，直至63周试验结束，并在每周的最后一天在每组随机抽取鸡蛋10枚，用于蛋品质的检测。
1.4 试验方法
1.4.1 生产性能的测定
预试期生产性能的统计为换料前一周的试验数据的平均值，试验期生产性能的统计为试验结束前4周的试验数据的平均值。
1.4.1.1 产蛋率的计算：产蛋率为统计期内日产蛋量的平均值。
日产蛋率＝每天的产蛋总重量/每天的蛋鸡存栏数
1.4.1.2 平均蛋重的计算：平均蛋重为统计期内日平均蛋重的平均值。
日平均蛋重＝每天的产蛋总重量/每天的产蛋数
1.4.1.3 产蛋量的计算：产蛋量为所有存栏蛋鸡每只鸡每天平均产蛋的重量，即统计期内日产蛋量的平均值。
日产蛋量＝日平均蛋重×日产蛋率
1.4.2 蛋品质的测定
1.4.2.1 蛋黄胆固醇的测定
①随机取各组的样品鸡蛋，每组3枚，将鸡蛋煮熟，冷却后分离蛋黄与蛋清，蛋黄立即称重；②将每个蛋黄放入烧杯中捣碎，搅拌均匀；③准确称取混匀样品1.000 0 g（精确到小数点后4位）作为待测样品；④用甲醇：氯仿（2：1）混合溶液充分研磨提取至无明显颗粒为止，过滤到10 ml具塞刻度试管中，并补充稀释至10 ml刻度处，混匀，密封，放入4 ℃冰箱中静置过夜；⑤取试管中上清液30 μl加入总胆固醇试剂3 ml[总胆固醇试剂盒-CHO（酶法），北京北化康泰临床试剂有限公司]，37 ℃水浴10 min。同时用蒸馏水作空白管，用总胆固醇试剂盒中的标准品作标准管，在520 nm处，以空白管调零，读取各管吸光度；⑥计算蛋黄中总胆固醇含量，取其平均值。
1.4.2.2 蛋黄颜色的测定
罗氏比色扇法：随机取各组的样品鸡蛋，每组3枚，打开后观察蛋黄颜色，并与罗氏比色扇进行比对，确定蛋黄的比色值并记录，取其平均值。
2 结果与分析
2.1 预试期内生产性能的比较（见表3）
表3 预试期试验组与对照组生产性能的比较（x±s）
注：数据没有肩标表示差异不显著（P>0.05）；肩标*表示差异显著(P<0.05)；肩标**表示差异极显著(P<0.01)。下表同。
由表5和表6可以看出，在试验期内试验组与对照组相比，蛋黄胆固醇含量降低了1.26 mg/g，降低15.35％，差异显著（P<0.05）；蛋黄颜色值升高了0.86，升高14.58％，差异显著（P<0.05）。
3 讨论
3.1 复合氨基酸小肽螯合锌对蛋鸡产蛋性能的影响
微量元素螯合物因其独特的螯合环结构而具有与普通金属元素不同的吸收机制,位于五元环或六元环螯合物中心的金属元素可以通过小肠绒毛刷状缘,以氨基酸或肽的整体形式直接从肠粘膜吸收。金属离子由于在螯合物的中心而免遭一些理化因子的影响,能被有效吸收,所以其生物利用率高,并能减少不同金属元素之间的拮抗作用。而小肽与游离氨基酸在动物体内具有相互独立的吸收机制,动物体内存在着独立的小肽转运系统,小肽能完整地通过肠粘膜细胞而进入体循环,具有转运速度快、能耗低、效率高、载体不易饱和等优点。乔伟等(2006)[3]指出,小肽参与螯合时一般由末端氨基和邻近的肽键氧形成单环螯合结构,羧基由于空间位阻一般不参与螯合,即使参与也是以不太稳定的副键参与,所以这种螯合物保留有比较自由的羧基可以通过小肽转运系统吸收,小肽螯合物比氨基酸螯合物还要易于吸收。因此,复合氨基酸小肽螯合微量元素添加剂将具有容易吸收、生物学效价高,并能同时补充多种氨基酸、小肽和螯合微量元素等优点。
3.2 复合氨基酸小肽螯合锌对蛋品质的影响
汪国和等（2004）[4]报道，在蛋鸡日粮中添加大豆活性肽可大幅度地降低蛋黄中胆固醇的含量，其机理可能与大豆活性肽能阻碍肠道内胆固醇的再吸收，降低蛋黄胆固醇沉积，并能促使其排出体外有关。试验组与对照组相比蛋黄胆固醇含量降低，是否与蚯蚓水解过程中产生的肽类有关还有待于进一步研究。
王怀禹（2008）[5]认为棉籽饼、菜籽粕中含有的抗营养因子会影响蛋黄的着色，试验组与对照组相比蛋黄颜色升高，可能与蚯蚓水解液中含有生物活性物质对抗营养因子有一定的降解作用有关。
3.3 经济效益分析
配制30 kg预混料需要干蚯蚓0.75 kg，菜粕粉1 kg，按照干蚯蚓30 元/kg、菜粕粉2元/kg，加工费2元计算，需要增加投入26.5元。30 kg预混料可以配制蛋鸡日粮1 t，按每只鸡每天消耗130 g日粮，1 t日粮是7 865只鸡一天的饲喂量，可以增加鸡蛋产量32.56 kg，按鸡蛋价格6 元/kg计算，增加收入195.36元，投入产出比可达1：7.37，因此，在蛋鸡生产上应用复合氨基酸小肽螯合锌可以产生较好的经济效益。
4 结论
利用蚯蚓制备的复合氨基酸小肽螯合锌可以提高蛋鸡的生产性能，并对提高蛋品质有一定的帮助。
参考文献
[1] 刘波,谢骏,郑小平,等.蚯蚓蛋白酶解工艺及其产物分析[J].上海水产大学学报,2006,15(1):78-83.
[2] 贾久满,朱莲英,于慧颖,等.用蚯蚓制备复合氨基酸小肽螯合微量元素的研究[J].饲料研究,2009(7):23-27.
[3] 乔伟,周安国,王之盛,等.小肽促进微量元素吸收的研究进展[J]. 饲料工业,2006,27(17):12-14.
[4] 汪国和,张日俊.脂肪代谢调控及其在改善鸡蛋品质中的应用[J].饲料广角,2001(11):19-21.
[5] 王怀禹.影响蛋黄颜色的因素及调控措施[J].生产指导,2008(234):42-43.（编辑：刘敏跃，lm-y@tom.com）
贾久满，唐山师范学院生命科学系，副教授，063000，河北省唐山市建设北路156号。
李成会、吝祥根，单位及通讯地址同第一作者。
王学法，冀州市职教中心。
收稿日期：2009-11-02
★ 唐山市应用基础研究项目《蚯蚓体内生物活性物质的鉴定与应用》(07160214B)；唐山师范学院重点基金项目《蚯蚓饲料添加剂在蛋鸡生产上的应用研究》（09B03）