作者：王恬1,傅永明2,吕俊龙3,蒋厚生4,李亚平4,陈才勇1,於朝梅1 来源：畜牧频道 发布时间：2008-3-28
（1. 南京农业大学动物科技学院, 江苏南京 210095； 2. 山东省畜牧局, 山东济南 250022； 3. 江苏南通油脂厂, 江苏南通 226002； 4. 胜利油田, 山东东营 257102）
摘要：50头21日龄断奶的胜利白猪随机分为5组,Ⅰ组（对照组）为基础日粮组；Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ组分别为基础日粮+1%,2%,3%小肽营养素；Ⅴ组为基础日粮+ 2%SDPP。试验期28d。结果表明,添加3%小肽营养素后,仔猪平均日增重比对照组提高33.67%（P<0.05）,料重比下降8.4%（P<0.05）与添加2%SDPP的效果类似。添加小肽营养素后,仔猪十二指肠、空肠、回肠的绒毛长度增加、隐窝深度减小,这种趋势随着小肽营养素添加量的增加而提高。小肽营养素能刺激仔猪断奶后十二指肠食糜乳糖酶、淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶的活性,以添加3%小肽营养素和2%SDPP效果较好。小肽营养素可促进断奶仔猪免疫系统发育,增加血液中IgG浓度（P<0.05）。
关键词：小肽营养素；断奶仔猪；生长发育；小肠；免疫
中图分类号：S82815 文献标识码：A 文章编号： 052925130（2003）0620004205Effects of mini-peptides on the growth performance and the development of small intestines in weaning pigletsWANG Tian1, FU Yong-ming2, LV Jun-long3, J IANG Hou-sheng4,LI Ya-ping4, CHEN Cai-yong1, YU Chao-mei1（ 1. College of Animal Science and Technology , Nanjing Agric Univ, Nanjing 210095 , China ；2. Shandong Animal Husbandry Bureau, Jinan 250022, China； 3. Nantong Lipids Company, Nantong 226002, China；4. Shengli Oil Field, Dongying 257102, China）Abstract： 50 male weaning Shengli White piglets were randomly divided into 5 groups. The piglets were fed with basal diet , basal diet + 1%mini-peptides （MP）, basal diet + 2%MP , basal diet + 3%MP , basal diet + 2% serum derived protein powder （sdpp） in Group Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳand Ⅴ respectively for 28 days. Compared with the control, the average daily gain was increased by 3.67 % （ P < 0.05） and the Feed： Body Weight was decreased by 8.4 % （ P < 0.05） in Group Ⅳ. After supplementing MP in diets, the villi heights of duodenum, jejunum and ileum were longer and the crypt depths were lower. This tendency became more evident when the adding rate of MP was elevated. Both MP and SDPP enhanced the activities of lactase, amylase, lipase and trypsin in duodenum chyme, with the best effects in GroupⅣand Ⅴ. In addition, MP could improve the development of piglets′immune system, increase the IgGconcentration in serum and decrease the diarrhea rate. In conclusion, MP can improve the growth performance and the development of small intestines in weaning piglets. These effects were most significant after adding 3 %MP to diets, which could be in replacement of 2 % SDPP.Key words：mini-peptides；weaning piglets；growth and development；small intestine；immune
动物的蛋白质代谢,一直是动物营养界所关注的核心问题之一。传统的蛋白质营养理论认为,饲料蛋白质只有在胃肠道被水解成氨基酸后,才能被小肠吸收进入血液,再转运到机体的各个组织参与代谢,发挥其营养功能。然而近年来的一些试验发现,用低蛋白质的组合氨基酸日粮饲喂动物,并不能达到最佳的生产性能[1]。早在20世纪80年代就有研究发现,小肽能被动物胃肠道完整地吸收。动物对小肽的吸收不仅具有速度快、耗能低、不易饱和等特点,而且可以消除游离氨基酸之间的吸收竞争[2]。以小肽形式供给蛋白质,可显著提高动物对蛋白质的利用率[3]。
本试验利用生物酶解法产生富含小肽的制品（小肽营养素） 与血浆蛋白粉（SDPP） 进行饲养对比试验,以验证肽制品的营养生物学价值,为进一步开发应用小肽制品提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 试验动物在胜利油田桩西工厂化养猪场从10窝胜利白猪中选择体重相近的仔猪50头（每窝选5头小公猪）,21日龄断奶,饲养至49日龄,试验期28d。
1.2 试验日粮及试验分组设计
试验基础日粮参照NRC（1998）猪营养需要配制,其组成为：玉米57%、豆粕11 %、膨化大豆粉18%、鱼粉5%、乳清粉5%、贝壳粉1.1%、脱氟磷酸氢钙0.4 %、食盐0.3 %、赖氨酸0.11 %、添加剂2%（含维生素和矿物质）。试验基础日粮含DE14.0MJ/kg、CP20%、赖氨酸1.2%、蛋氨酸0.35%、蛋+胱氨酸0.6%、钙0.8%、有效磷0.4%（计算值）。试验用血浆蛋白粉（SDPP）由美国进口,小肽营养素由山东天易科技有限公司试生产。试验采用单因子随机分组设计,从每窝断奶仔猪中随机选1头公猪分入Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ组（每组10头）。其中,Ⅰ组为对照组（基础日粮组,另加膨化大豆粉1.5%、鱼粉0.5%）,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ组为试验组,分别在基础日粮中添加1%,2%,3%小肽营养素。V组在基础日粮中添加2%血浆蛋白粉SDPP。
1.3 测定内容试验期仔猪自由采食和饮水,记录耗料量及各组仔猪的健康与腹泻情况。仔猪分别在3周龄（试验开始时）和6、7周龄各称重一次。在6周龄时,每组随机选择3头仔猪,心脏采血20 mL,分离血清,-20℃保存,待测血液生化指标。然后宰杀仔猪取样：（1）取十二指肠内容物,立即放入液氮罐中速冻,然后移入-20℃冰柜中保存,以备分析消化酶的活性。（2）在十二指肠、空肠和回肠中部截取1.0 cm长的组织样,生理盐水冲洗后用Bouin氏液固定12～16h。用乙醇逐级脱水至100%浓度后,二甲苯透明石腊包埋。切片（5μm）用苏木精-伊红（HE）染色,树胶封片。观测指标包括绒毛高度、绒毛宽度、隐窝深度和肠壁总厚度。（3）分离脾脏、下颌淋巴结和腹股沟淋巴结并称重,计算免疫器官指数[免疫器官指数=免疫器官重量（g）/活体重（kg）] 。
1.4 生化分析十二指肠食糜中消化酶活性的测定：（1）乳糖酶：将十二指肠食糜匀浆液与底物乳糖溶液混合培养（37℃）15 min 后,用分光光度计（岛津UV-120,日本）测得所释放出的游离葡萄糖量,计算乳糖酶活性（U/ mg）。（2）淀粉酶：用1%淀粉溶液作为反应底物,在pH 6.4、40℃条件下反应20min,测定淀粉酶分解淀粉后游离出来的麦芽糖的量,计算酶活性。（3）脂肪酶：将磷酸缓冲液（pH7.5）和聚乙烯醇橄榄油乳化液置于三角瓶中,于40℃温水浴中预热10min, 加入待测十二指肠内容物匀浆液,40℃水浴保湿15min,立即加入95%乙醇终止反应。然后用氢氧化钠标准溶液滴定至微红色,根据所用的氢氧化钠量计算脂肪酶活性（U/mg）。（4）胰蛋白酶：采用Worthington法测定。十二指肠食糜匀浆液的蛋白质浓度用福林酚试剂法测定,血清免疫球蛋白IgG含量用全自动生化分析仪测定。
1.5 统计分析
采用SPSS统计软件,进行方差分析。方差分析显著者,再用LSD法进行组间比较分析。所有数据以“平均值±标准差”表示。
2 结果与讨论
2.1 仔猪生产性能由表1可见,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ组仔猪7周龄体重显著高于Ⅰ组（P<0.05）,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ，Ⅴ组间仔猪体重无显著差异（P>0.05）,试验增重以Ⅳ组为最好。与对照组相比,3～7周龄Ⅳ、Ⅴ组的平均料重比显著低于Ⅰ组（P<0.05）,其余各组之间差异不显著。
结果表明,在日粮中添加小肽营养素和SDPP可提高断奶仔猪日增重,降低料重比和腹泻率（数据未列出）。随小肽营养素添加量的增大,断奶仔猪日增重逐渐增加,料重比与腹泻发生率呈现降低的趋势。添加3%小肽营养素组比对照组平均日增重提高33.67%（P<0.05）,料重比下降8.4%（P<0.05）。周围等（2000）的试验结果也表明,在仔猪日粮中添加3%小肽制品后,日增重比对照组提高了8%,饲料转化率提高了约11%[4]。通过对仔猪腹泻情况的观察发现,基础日粮中添加小肽营养素和SDPP可减少仔猪腹泻。其中,3%小肽营养素防止仔猪腹泻的效果与2%SDPP相近。引起断奶仔猪腹泻的原因复杂,饲料应激是仔猪腹泻的原发性原因[5]。仔猪早期断奶后肠道受损、消化酶活性降低,致使蛋白质不能很好地被消化吸收,继而在大肠发生腐败,产生的氨和胺类物质对肠道粘膜有毒性作用,腹泻加重[6]。小肽特别是2～3肽,可被仔猪完整而有效地吸收,减少了大肠后段氨气和有毒胺类的产生。同时,能维持消化道正常的免疫功能,降低腹泻率[7]。特别是一部分作为营养调控物的生理活性小肽,可直接作为神经递质、间接刺激肠道激素受体或促进酶的分泌而发挥生理调节作用,从而促进小肠发育[8],并使小肠的免疫功能和吸收能力得到加强,有利于营养物质在仔猪体内的沉积,最大限度地发挥其生产潜能。
2.2 小肠组织学指标图1所示结果表明,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ组的十二指肠绒毛高度显著高于Ⅰ和Ⅱ组（P<0.05）,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ组的十二指肠隐窝深度显著低于Ⅰ组（P<0.05）。Ⅳ组的空肠绒毛高度显著高于其余各试验组（P<0.05）,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ组的空肠隐窝深度显著低于Ⅰ组（P<0.05）, 而Ⅱ,Ⅲ，Ⅳ,Ⅴ各组间差异不显著（P>0.05）。Ⅳ组回肠的绒毛高度显著高于Ⅰ组（P<0.05）,其余各组之间差异不显著（P>0.05）；各组之间回肠隐窝深度的变化趋势与空肠类似。比较各组各肠段间的绒毛宽度与肠壁总厚度指标,无显著差异（P>0.05）。
试验结果表明,添加小肽营养素和SDPP可减轻仔猪断奶所致的小肠绒毛萎缩和隐窝加深的程度,促进仔猪肠道组织与功能的发育。许多研究表明,仔猪断奶将导致肠道组织损伤,如小肠绒毛变短、淋巴细胞增加、隐窝加深,进而使消化酶活性降低,并导致腹泻[8]；这种肠道组织损伤,早期断奶仔猪的表现尤为明显。顾宪红（2000）认为,仔猪断奶后肠绒毛萎缩与隐窝增生是引起消化道功能下降、并导致生长受阻的根本原因[10]。在仔猪日粮中的活性小肽可减轻仔猪肠粘膜组织的损伤[11],某些活性肽能刺激小肠绒毛增生,促进幼龄动物小肠的发育成熟[12]。
本试验结果也表明,小肽营养素对促进断奶仔猪小肠的发育有明显促进作用。
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（1. 南京农业大学动物科技学院, 江苏南京 210095； 2. 山东省畜牧局, 山东济南 250022； 3. 江苏南通油脂厂, 江苏南通 226002； 4. 胜利油田, 山东东营 257102）
摘要：50头21日龄断奶的胜利白猪随机分为5组,Ⅰ组（对照组）为基础日粮组；Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ组分别为基础日粮+1%,2%,3%小肽营养素；Ⅴ组为基础日粮+ 2%SDPP。试验期28d。结果表明,添加3%小肽营养素后,仔猪平均日增重比对照组提高33.67%（P<0.05）,料重比下降8.4%（P<0.05）与添加2%SDPP的效果类似。添加小肽营养素后,仔猪十二指肠、空肠、回肠的绒毛长度增加、隐窝深度减小,这种趋势随着小肽营养素添加量的增加而提高。小肽营养素能刺激仔猪断奶后十二指肠食糜乳糖酶、淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶的活性,以添加3%小肽营养素和2%SDPP效果较好。小肽营养素可促进断奶仔猪免疫系统发育,增加血液中IgG浓度（P<0.05）。
关键词：小肽营养素；断奶仔猪；生长发育；小肠；免疫
中图分类号：S82815 文献标识码：A 文章编号： 052925130（2003）0620004205Effects of mini-peptides on the growth performance and the development of small intestines in weaning pigletsWANG Tian1, FU Yong-ming2, LV Jun-long3, J IANG Hou-sheng4,LI Ya-ping4, CHEN Cai-yong1, YU Chao-mei1（ 1. College of Animal Science and Technology , Nanjing Agric Univ, Nanjing 210095 , China ；2. Shandong Animal Husbandry Bureau, Jinan 250022, China； 3. Nantong Lipids Company, Nantong 226002, China；4. Shengli Oil Field, Dongying 257102, China）Abstract： 50 male weaning Shengli White piglets were randomly divided into 5 groups. The piglets were fed with basal diet , basal diet + 1%mini-peptides （MP）, basal diet + 2%MP , basal diet + 3%MP , basal diet + 2% serum derived protein powder （sdpp） in Group Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳand Ⅴ respectively for 28 days. Compared with the control, the average daily gain was increased by 3.67 % （ P < 0.05） and the Feed： Body Weight was decreased by 8.4 % （ P < 0.05） in Group Ⅳ. After supplementing MP in diets, the villi heights of duodenum, jejunum and ileum were longer and the crypt depths were lower. This tendency became more evident when the adding rate of MP was elevated. Both MP and SDPP enhanced the activities of lactase, amylase, lipase and trypsin in duodenum chyme, with the best effects in GroupⅣand Ⅴ. In addition, MP could improve the development of piglets′immune system, increase the IgGconcentration in serum and decrease the diarrhea rate. In conclusion, MP can improve the growth performance and the development of small intestines in weaning piglets. These effects were most significant after adding 3 %MP to diets, which could be in replacement of 2 % SDPP.Key words：mini-peptides；weaning piglets；growth and development；small intestine；immune
动物的蛋白质代谢,一直是动物营养界所关注的核心问题之一。传统的蛋白质营养理论认为,饲料蛋白质只有在胃肠道被水解成氨基酸后,才能被小肠吸收进入血液,再转运到机体的各个组织参与代谢,发挥其营养功能。然而近年来的一些试验发现,用低蛋白质的组合氨基酸日粮饲喂动物,并不能达到最佳的生产性能[1]。早在20世纪80年代就有研究发现,小肽能被动物胃肠道完整地吸收。动物对小肽的吸收不仅具有速度快、耗能低、不易饱和等特点,而且可以消除游离氨基酸之间的吸收竞争[2]。以小肽形式供给蛋白质,可显著提高动物对蛋白质的利用率[3]。
本试验利用生物酶解法产生富含小肽的制品（小肽营养素） 与血浆蛋白粉（SDPP） 进行饲养对比试验,以验证肽制品的营养生物学价值,为进一步开发应用小肽制品提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 试验动物在胜利油田桩西工厂化养猪场从10窝胜利白猪中选择体重相近的仔猪50头（每窝选5头小公猪）,21日龄断奶,饲养至49日龄,试验期28d。
1.2 试验日粮及试验分组设计
试验基础日粮参照NRC（1998）猪营养需要配制,其组成为：玉米57%、豆粕11 %、膨化大豆粉18%、鱼粉5%、乳清粉5%、贝壳粉1.1%、脱氟磷酸氢钙0.4 %、食盐0.3 %、赖氨酸0.11 %、添加剂2%（含维生素和矿物质）。试验基础日粮含DE14.0MJ/kg、CP20%、赖氨酸1.2%、蛋氨酸0.35%、蛋+胱氨酸0.6%、钙0.8%、有效磷0.4%（计算值）。试验用血浆蛋白粉（SDPP）由美国进口,小肽营养素由山东天易科技有限公司试生产。试验采用单因子随机分组设计,从每窝断奶仔猪中随机选1头公猪分入Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ组（每组10头）。其中,Ⅰ组为对照组（基础日粮组,另加膨化大豆粉1.5%、鱼粉0.5%）,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ组为试验组,分别在基础日粮中添加1%,2%,3%小肽营养素。V组在基础日粮中添加2%血浆蛋白粉SDPP。
1.3 测定内容试验期仔猪自由采食和饮水,记录耗料量及各组仔猪的健康与腹泻情况。仔猪分别在3周龄（试验开始时）和6、7周龄各称重一次。在6周龄时,每组随机选择3头仔猪,心脏采血20 mL,分离血清,-20℃保存,待测血液生化指标。然后宰杀仔猪取样：（1）取十二指肠内容物,立即放入液氮罐中速冻,然后移入-20℃冰柜中保存,以备分析消化酶的活性。（2）在十二指肠、空肠和回肠中部截取1.0 cm长的组织样,生理盐水冲洗后用Bouin氏液固定12～16h。用乙醇逐级脱水至100%浓度后,二甲苯透明石腊包埋。切片（5μm）用苏木精-伊红（HE）染色,树胶封片。观测指标包括绒毛高度、绒毛宽度、隐窝深度和肠壁总厚度。（3）分离脾脏、下颌淋巴结和腹股沟淋巴结并称重,计算免疫器官指数[免疫器官指数=免疫器官重量（g）/活体重（kg）] 。
1.4 生化分析十二指肠食糜中消化酶活性的测定：（1）乳糖酶：将十二指肠食糜匀浆液与底物乳糖溶液混合培养（37℃）15 min 后,用分光光度计（岛津UV-120,日本）测得所释放出的游离葡萄糖量,计算乳糖酶活性（U/ mg）。（2）淀粉酶：用1%淀粉溶液作为反应底物,在pH 6.4、40℃条件下反应20min,测定淀粉酶分解淀粉后游离出来的麦芽糖的量,计算酶活性。（3）脂肪酶：将磷酸缓冲液（pH7.5）和聚乙烯醇橄榄油乳化液置于三角瓶中,于40℃温水浴中预热10min, 加入待测十二指肠内容物匀浆液,40℃水浴保湿15min,立即加入95%乙醇终止反应。然后用氢氧化钠标准溶液滴定至微红色,根据所用的氢氧化钠量计算脂肪酶活性（U/mg）。（4）胰蛋白酶：采用Worthington法测定。十二指肠食糜匀浆液的蛋白质浓度用福林酚试剂法测定,血清免疫球蛋白IgG含量用全自动生化分析仪测定。
1.5 统计分析
采用SPSS统计软件,进行方差分析。方差分析显著者,再用LSD法进行组间比较分析。所有数据以“平均值±标准差”表示。
2 结果与讨论
2.1 仔猪生产性能由表1可见,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ组仔猪7周龄体重显著高于Ⅰ组（P<0.05）,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ，Ⅴ组间仔猪体重无显著差异（P>0.05）,试验增重以Ⅳ组为最好。与对照组相比,3～7周龄Ⅳ、Ⅴ组的平均料重比显著低于Ⅰ组（P<0.05）,其余各组之间差异不显著。
结果表明,在日粮中添加小肽营养素和SDPP可提高断奶仔猪日增重,降低料重比和腹泻率（数据未列出）。随小肽营养素添加量的增大,断奶仔猪日增重逐渐增加,料重比与腹泻发生率呈现降低的趋势。添加3%小肽营养素组比对照组平均日增重提高33.67%（P<0.05）,料重比下降8.4%（P<0.05）。周围等（2000）的试验结果也表明,在仔猪日粮中添加3%小肽制品后,日增重比对照组提高了8%,饲料转化率提高了约11%[4]。通过对仔猪腹泻情况的观察发现,基础日粮中添加小肽营养素和SDPP可减少仔猪腹泻。其中,3%小肽营养素防止仔猪腹泻的效果与2%SDPP相近。引起断奶仔猪腹泻的原因复杂,饲料应激是仔猪腹泻的原发性原因[5]。仔猪早期断奶后肠道受损、消化酶活性降低,致使蛋白质不能很好地被消化吸收,继而在大肠发生腐败,产生的氨和胺类物质对肠道粘膜有毒性作用,腹泻加重[6]。小肽特别是2～3肽,可被仔猪完整而有效地吸收,减少了大肠后段氨气和有毒胺类的产生。同时,能维持消化道正常的免疫功能,降低腹泻率[7]。特别是一部分作为营养调控物的生理活性小肽,可直接作为神经递质、间接刺激肠道激素受体或促进酶的分泌而发挥生理调节作用,从而促进小肠发育[8],并使小肠的免疫功能和吸收能力得到加强,有利于营养物质在仔猪体内的沉积,最大限度地发挥其生产潜能。
2.2 小肠组织学指标图1所示结果表明,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ组的十二指肠绒毛高度显著高于Ⅰ和Ⅱ组（P<0.05）,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ组的十二指肠隐窝深度显著低于Ⅰ组（P<0.05）。Ⅳ组的空肠绒毛高度显著高于其余各试验组（P<0.05）,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ组的空肠隐窝深度显著低于Ⅰ组（P<0.05）, 而Ⅱ,Ⅲ，Ⅳ,Ⅴ各组间差异不显著（P>0.05）。Ⅳ组回肠的绒毛高度显著高于Ⅰ组（P<0.05）,其余各组之间差异不显著（P>0.05）；各组之间回肠隐窝深度的变化趋势与空肠类似。比较各组各肠段间的绒毛宽度与肠壁总厚度指标,无显著差异（P>0.05）。
试验结果表明,添加小肽营养素和SDPP可减轻仔猪断奶所致的小肠绒毛萎缩和隐窝加深的程度,促进仔猪肠道组织与功能的发育。许多研究表明,仔猪断奶将导致肠道组织损伤,如小肠绒毛变短、淋巴细胞增加、隐窝加深,进而使消化酶活性降低,并导致腹泻[8]；这种肠道组织损伤,早期断奶仔猪的表现尤为明显。顾宪红（2000）认为,仔猪断奶后肠绒毛萎缩与隐窝增生是引起消化道功能下降、并导致生长受阻的根本原因[10]。在仔猪日粮中的活性小肽可减轻仔猪肠粘膜组织的损伤[11],某些活性肽能刺激小肠绒毛增生,促进幼龄动物小肠的发育成熟[12]。
本试验结果也表明,小肽营养素对促进断奶仔猪小肠的发育有明显促进作用。
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