摘要　棉粕蛋白质含量高达３８％～５０％，然而作为饲料其蛋白质品质较差，饲料利用率较低。为提高其蛋白质利用率，从自然界筛选出了能够高效降解棉粕大分子蛋白质的优良菌株４株，经生化与分子生物学试验鉴定为Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ（２株，编号为Ｈ１和Ｈ７），Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓ（１株，编号为Ｈ９）和Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ（１株，编号为Ｐ１）。通过单菌及组合发酵实验比较发现：最适宜菌种组合为Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ（Ｈ１）和Ａ．ｎｉｇｅｒ（Ｐ１）。两菌株组合发酵后，棉粕ＴＣＡ?ＮＳＩ（三氯乙酸氮溶指数）提高了２５．３４％，小分子多肽含量提高了１１％，游离必需氨基酸提高了２４％，蛋白质的体外消化率由４４．５６％提高到了７８．６１％，明显高于其他菌种组合，研究结果表明其组合发酵可有效改良棉粕蛋白品质，显著提高棉粕蛋白的饲用价值。关键词　棉粕　固体发酵　ＴＣＡ?ＮＳＩ小肽中图分类号　Ｑ８１９收稿日期：２０１０?０７?０９　　修回日期：２０１０?０８?０２?通讯作者，电子信箱：Ｂｚｈｕｇｅ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ　　随着养殖业和饲料工业的迅速发展，蛋白饲料资源相对匮乏成为制约我国养殖业发展的主要因素之一。我国是一个产棉大国，年可产棉粕６００万吨以上，资源量全球第一［１］，棉粕蛋白质含量高达３８％～５０％，是重要的植物性蛋白质资源之一（ＧＢ／Ｔ２１２６４?２００７）；但棉粕蛋白的饲料利用率较低，主要由于存在以下不利因素：一是含有棉酚［２］等抗营养因子，二是蛋白质消化利用率低，消化能值仅为豆粕的６５％左右，必需氨基酸含量少组成不平衡且利用率低［３?４］。从目前国内棉粕发酵的研究情况来看：研究棉粕脱毒的较多［５］，关注棉粕蛋白质改良的却较少，缺乏对棉粕发酵前后蛋白质降解规律的研究。针对这些问题，有关研究人员采用微生物发酵棉粕，但多为单一菌种的发酵研究，而对多菌种混合发酵方面研究较少［６］。　　蛋白质营养是氨基酸营养和小肽营养，以小肠可吸收肽的形式（二肽和三肽）为动物供应氨基酸对于提高饲料蛋白质利用率具有潜在营养意义［７］；多菌种制曲发酵可克服单菌种酶系不全，活性低的缺点，丰富所需的酶系。所以本研究从自然界中筛选出能够高效降解棉粕大分子蛋白的较适宜菌株，并进行了单菌和组合发酵试验。以发酵后棉粕ＴＣＡ?ＮＳＩ、小分子多肽［７］的含量及棉粕蛋白体外消化率为指标，对不同菌种及其组合进行发酵试验比较，以期获得最佳的菌种组合，有效降解棉粕大分子蛋白质为小分子多肽和氨基酸等易被消化利用的营养物质，改良棉粕蛋白品质，提高其饲料利用率，为解决我国乃至全球蛋白质饲料资源严重短缺问题提供有效的途径。１　材料与方法１．１　材　料１．１．１　原　料　棉粕购自饲料厂，试验测得其含游离棉酚９５０ｍｇ／ｋｇ，粗蛋白质４０．９８％，ＴＣＡ?ＮＳＩ３．５％。１．１．２　主要仪器　ＰＣＲ仪（Ｐｅｒｓｏｎａｌ），ＵＶＰ凝胶成像系统（ＡＬＰＨＡＩＭＡＧＥＲ），氨基酸分析仪（Ｈ?８３５?５０），蛋白凝胶电泳系统，凝胶柱（Ｓｕｐｅｒｄｅｘｐｅｐｉｄｅ１０／３００ＧＬ）。１．１．３　菌　株　菌种来源：实验室提供的棉粕，木样，土样及济南棉花地土样。１．１．４　培养基　初筛培养基（ｇ／Ｌ）：粉碎的棉粕１５，ＮａＣｌ５，ＣａＣｌ２５，葡萄糖１，琼脂２０，ｐＨ７．０；复筛发酵培养基：棉粕２０ｇ，Ｈ２Ｏ４０％，ｐＨ自然；马铃薯培养基（ｇ／完整内容下载地址http://www.cnferment.net/Soft/UploadSoft/可改良棉粕蛋白的菌株选育及其发酵.rar