新型合硫肿瘤坏死因子类肽抑制剂的合成与活性王 鼎， 张奇涵， 许家喜(北京大学化学与分子工程学院， 生物有机与分子工程教育部重点实验室， 北京 100871) 关键词 肿瘤坏死因子； 多肽；类肽抑制剂 肿瘤坏死因子(Tum or necrosis factor， TNF)是一类重要的细胞因子， 可以调节发炎反应. TN F 主要由受刺激的单核细胞、T 细胞和细胞分裂素激活的 B 细胞分泌， 适量的 TN F-α能够激活患者的免疫系统， 增强免疫力， 但过量的 TNF-α分泌往往造成其它组织的损伤， 如果发现有效的抑制剂， 来调节TN F-α生理活性的表达， 则可以减轻或免除患者的痛苦， 延长患者的生命[ 1，2 ]， 目前发现多肽是较好的抑制剂， 但其体内半衰期极短， 临床应用受到限制。 后来又发展了类肽类抑制剂， 其中具有二到三肽基本骨架的 类 肽 化 合 物 为 有 效 的 抑 制 剂(Schem e 1 中 1)，这类抑制剂在体内易于弥散而不易降解， 适合临床应用[ 1 ]为了发展新型 TN F 类肽抑制剂， 考虑到酶活性中心含有 Zn2 +离子， 我们以通式 1 的骨架为基础， 设计并合成了一类含有硫原子的类肽化合物 2， 其具有三肽的基本骨架， 羟胺的游离羟基和侧链上的硫原子均可与金属蛋白酶活性中心的 Zn2 +络合， 起抑制活性作用。 1 实验部分 1.1 仪器与试剂 Y anaco M P500 显微熔点仪； Elem en tar Vario EL 元素分析仪；V arian M ercury 200M H z 核磁共振仪(CD Cl为溶剂， TM S 为内标)； VG -ZAB -H S 质谱仪，Boc-A la， Boc-Phe， Boc-2-N al， D CC 和 HOBt购自 A ldrich 公司， 二氯甲烷经碳酸钾干燥重蒸，其它溶剂均为分析纯试剂， Boc-L-A laN HCH2CH2N H Z[ 3]、二肽 Boc-L-Phe-A la-N H CH2Ph[ 3 ]、Boc-L-N al-L-Ala-N H CH2CH2N H -Z[ 4 ]、2-异丙硫基丁二酸-4-异丙酯[ 5 ]和 2-苯硫基丁二酸-4-异丙酯[ 5]分别按文献方法合成， 分析数据与文献一致. 按文献[6]方法， 将二肽酰胺 N -(2-苄氧羰基氨乙基)-N-[(N -叔丁氧羰基)-L-苯丙氨酰]-L-丙氨酰胺(7a) 和 2-烷 /芳基巯基丁二酸-4-酯(5) 与二肽酰胺(7)偶联， 得白色固N -[4-异丙氧基-2-(1-烷 /芳硫基)-1，4-二氧代丁基]-L-苯 /萘丙氨酰-L-丙氨酰胺(8)。 1.2 目标产物 N -(4-羟氨基-2-烷 /芳硫基-1，4-二氧代丁基)-L-苯/萘丙氨酰-L-丙氨酰胺(2)的合成参照文献[3]方法， 将 0.14 g(2 m m ol) H O NH2• H Cl溶于 2 m L 无水甲醇溶液中， 将其与含有 0.18 g(3.2 mmol) KOH2 m L无水甲醇溶液混合， 在 0 ℃下冷却搅拌 1 h， 过滤掉不溶物， 将滤液滴加到化合物 8(0.56 m m ol)溶于2 m L甲醇的溶液中，15 min后， 停止反应，减压除去溶剂， 加入2 mL水， 用1 m ol/L H Cl将水溶液的pH调到5， 然后用饱和 NaH CO3溶液中和， 过滤生成的白色沉淀， 将滤饼用乙酸乙酯洗涤， 乙醇-石油醚重结晶， 得到白色固体。 2 结果与讨论 化合物 2， 7 和 8 的物理性质、元素分析结果和谱学数据见表 1 和表 2，具有通式 1 结构的 TN F 类肽抑制剂虽然有效， 但合成不方便[3]，与化合物 1 具有相同分子骨架的化合物 2， 由于硫原子的引入，合成比较方便， 也可能会增强其与酶活性中心 Zn2 +离子的结合， 从而增强其抑制作用， 通过异丙硫醇和苯硫酚引入的异丙硫基和苯硫基可以模拟缬氨酸和苯丙氨酸的结构，合成的二肽酰胺和 2-烷 /芳基丁二酸-4-酯用 N ，N′-二环己基碳二酰亚胺(DCC) 和 1-羟基苯并三氮唑(HOBt) 缩合偶联， 经羟胺解后得到化合物2， 合成路线见 Schem e 2。 生物活性测定结果表明[7 ]， 合成的部分类肽抑制剂对脂多糖诱发的H L-60 细胞分泌 sTN F-α有明显的抑制作用.，分别加入化合物2c， 2d 和2e 2 h 后均取 得了较明显的抑制效果， 抑制率分别为27.3% ， 54.5% 和 54.5% ， 但 4 h 后化合物 2d 不再起抑制作用， 说明它的作用衰减较快， 而化合物2c和 2e 较稳定， 其中以化合物 2e 的效果最好， 有希望发展成TN F的有效抑制剂， 具有潜在的应用前景。