保存：　　大多肽在-20℃很稳定，特别是冷冻干燥并保存在干燥器中，在将它们暴露于空气之前， 冷冻干燥多肽可以放于室温。这将是湿度影响减少，当无法冷冻干燥时，最好的方法是以小的工作样量存放。 　　对于含Cys, Met orTrP的多肽，脱氧缓冲剂对其溶解必不可少，因为这种多肽可易空气氧化， 在封瓶前，慢慢流过多肽的氮气或氩气也会降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解，所有这些肽与不含这些有问题解苷的那些肽相比，生命期有限。 溶解性：　　大多肽的道选溶剂是超纯抽气水。稀乙酸或氨水分别对于碱性或酸性多肽的溶解很重要。这些方法不溶的多肽， 需要DMF、脲、guanidiniam chloride或acetonitnle来溶解，这些溶剂可能某些实验有副作用。所以我们建议设计多肽时要加注意。　　残基Ala, Cys , Ile, Leu, Met, Phe和Val将全增加多肽的溶解难度。 　　 多肽的保存和操做　　包装 1mg或更少的多肽按净重包装，声明的小瓶重不含相关抗离子和水。 例如，氨基酸分析决定的肽含量是80%， 在1mg样品中，那么瓶中毛重是1.25mg。　　大量的多肽以毛重算。标出的重量含相关抗离子和水， 例如，25mg样品中肽百分比为90%，那么，实际肽量为25mg×90%=22.5mg　　不要把肽含量和纯度搞混了。肽的纯度可能是100%， 而肽含量相关带电基团（如Arg, Lys ）的抗离子量和肽新水性决定。这是合成肽的本身特性。冻干肽的保存　　所有产品应存于冰箱， 最好为-20℃。多数肽以此方法可以存放几年不变。肽溶液的保存　　溶液肽远比冻干形式不稳定，溶液应为中性pH(pH5-7), -20℃保存的，为避免样品的反复冻融， 最好分成小样存放。一份样品融冻后未用完， 应扔掉，细菌降解有时会成为溶液肽的麻烦， 为克服此，肽应溶于无菌水， 或肽溶液用0.2μ M滤膜过滤。多肽的重建和操作　　多数肽溶于无菌蒸溜水。初次溶解时，要注意使初始浓度比要求浓度大，如果多肽仅有限溶解性， 这便允许加入其它溶解剂或缓冲盐。　　如果多肽在水中的溶解性有限，有几种选择可帮助溶解：　　对碱性肽用稀乙酸（含Arg , Lys , His）　　酸性肽用稀氨水（含Asp, Glu）　　对极疏水的肽用10%有机修饰物（Acetonitnile , Methanol）　　极不溶的肽用DM50或DMF　　guanicline hydrochloride或脲的浓溶液也很有用， 与上述方法合用， 声处理也是溶解多肽的有效手段。多肽的包装　　目录中所有多肽除特别说明外，纯度为95~98%。包装为小瓶冻干粉。 除特别注明外，多肽净重包装， 例如，1mg瓶的β-amyloid 1-40精确含1mg的多肽。多肽净重由氨基酸分析得到的肽含量计算。例如， 一个多肽样品毛重5mg，氨基酸含量85%， 多肽净重为5mg×0.85=4.25mg。请注意， 多肽含量不是多肽纯度，与抗离子象乙酸盐和溶剂，特别是水结合量合成多肽的本身特性。多肽纯度可能达100%， 但合成品中多肽含量由氨基酸组成，硫水性， 和多肽对溶剂和离子的暴露决定，特别是在纯化过程中， 无论多肽如何纯，冻干粉多肽含量一般为70-85%。 剩余15-30%由其它基本非肽成份构成。多肽应用和保存　　多肽具广泛的溶解性。多肽不溶的主要问题是形成二级结构。除了最太肽外，这点都会发生， 在有多重疏水残基的肽中更显著。盐会促进二级结构形成。我们建议先在无菌蒸馏水或去离子中溶解多肽。如需要增加溶解率， 可用声处理。溶解仍有问题， 加少量稀乙酸（10%）或氨水，会便于溶解。　　要长期保存多肽， 最好冷冻干燥，冷干粉可在-20℃或更低存放几年而很少或无降解。溶液中的多肽远不稳定。 多肽易受细菌降解，应用无菌纯化水溶解。　　含有Met, Cgs或Try残基的多肽溶液由于氧化，寿命有限。应溶于无氧溶剂， 为防止重复冻融的破坏， 建议溶解过量的肽的便实验，其余多肽以固体形成保存。固相多肽合成Fmoc方法　　任何多肽链的关键连接为肽键，由一个氨基酸的氨基与另氨基酸的缩合形成。通常一个氨基酸由一个中心碳原子组成，它由四个基它基团包围： 氨基、羰基、基和侧链。 侧链，称为R，区别不同氨基酸的结构。某些侧链含有干扰肽键形成的功能团。因此侧链功能团的封闭很重要。　　图工显示了Fmoc合成的一般流程，首先第一个Fmoc氨基酸通过一个酸性接头接到不溶载体树脂上，Fmoc去保护通过用碱处理树脂来完成，一般是Poperidine。 用预先激活或原位激活连接第二个Fmoc氨基酸。要求总多肽合成后，通过TFA分离来除去树脂和去保护。Fmoc分离固相多肽合成中多肽分离主要用酸解Fmoc法用弱酸，比如TFA或TMSBr。各种添加剂， 一般为thiol compound , 水和酚，用来保护多肽的免分离中Carbocation的破坏。下列保护基与TFA和TMSBr分离相合：（略）基于保护基团的类别，必须使用去保护剂的组合。 例如， 当Boc和tButyl存在时，它们的Carbocation对应物能与Trp, Tyr和Met反应形成tbutyl产物。EDT是极有效的t-butyl trifluoroacetate清除剂， 但它不保护Trp。 因此，必须加水以控制烷基化。Trp的吲哚环和Tyr的OH极易与Pmc反应。水再次表现出对此反应的抑制。Trt和Mtr基团也有相似情形。较此适当组合清除剂将极大降低副反应。tBoc和CBZ多肽合成tBoc合成法见图3tBoc法的分离法Boc使用强酸，比如HF，TFMSA或TFMoTf。分离加入各种添加剂， 一般为thiol化合物以保护多肽免受carbocation破坏。HF分离法（如下）略TFMSOTf分离TMSOTf分离SPPS的一般连接方法适于固相多肽合成的连接反应要求酰化反应，对同源多肽最有效。Fmoc SPPS连接方法 FmocSPPS最常用的连接法是活性酯， 要么原位，要预先激活。 起初P-nitrophenyl和N-hydnxysuccinimide激活酰是常用形式。 甚至，有HOBt时，连接反应也很慢， 此外，Fmoc氨基酸ONSu、酯与succinimido-carbonyl-β-alanine -N-Hydroxysuccinidide酯副产物的形成相关。今天最常用的激活酯是Opfp和Odhbt。有HoBt时反应速度极快，副产物少。另一方面， 使用象DCC，HBTU，BOP，BOP-Ce，或TBTU活化剂时， 能原位进行许多连接反应。Carbondiimide的直接添加是最佳选择。 然而，TBTU和HBTU第二个出现，接着BoP, 最后是BoP-CE。再者， 酯连接发现BoP/HoBt>Carbodiimido/HoBt> Carbodiimido/ODHbT> Carbodiimide/Opfp。最近以来，HOAt和其对应Uronium盐同类物HATU的发展，发现此HoBt和HBTU具更强催化活性， 结果是增加连接产出，缩短连接时间， 消旋降低。 故此，更适合阻位氨基酸的连接，使得难合成肽的合成更成功。tBoc SPPS的普通连接法Carbodiimides, 主要是DCC是使用多年的连接试剂，主要的问题是激活和酰化过程中dicyclohexylurea的沉淀。并且伴有许多副反应， 已有几种产生可溶脲的Carbodiimide，例如DIC, t-butylmethyl-和t-tatyllethyl-carbodiimide, 但是这些试剂未解决副反应的问题。结果生产出了新的激活剂。 首先是ＢＯＰ，随后是PyBrop, PyBOP, HBTU, TBTU和ＨＡＴＵ。所有前述试剂都要活性碱基。所有前面讨论的ＤＣＣ及其衍生物都通过对称酐的形成起作。通常， 对称酐反应性极强已广泛用于ＳＰＳＳ，特别t-Boc合成中， 对称酐整合入Fmoc氨基酸有一些困难，例如，从N-(3-dimethylamino propyl ) -N?/FONT>-ethyl -carbodiimides -HG制备的对称酐， 由于Z-alkory-5(4H)-oxayolne中间体的形成， 在Carbodiimidie和tertiany amines存在时重排， 还有， 不是所有的Fmoc 对称酐都溶于ＤＣＭ，或者无论所有试剂如何都不溶。 对称酐的另一种改变是混合酐，Carboxglic-Carbonate或Ｃarboxglic-phosphinic混合酐， 典型的情况且是， 由活性isobutyl-或isopropyl-choroformate制备这些， 用Nox被阻氨基酸代替phosphinic chloride。通常反应迅速及少或无有副反应。混合酐，N-carboxy酐(NCAS), 也叫，Leuch酐，已广泛用于多聚氨基酸制备，这类化合物联合Nox保护和活化炭基，一旦和另一个氨基酸或肽残基反应， 释放CO2做为