近年来，随着生物化学，基因工程技术的迅速发展，人们对多肽产品已经有突飞猛进的认识，多肽产品在生物、医学、食品、化妆品、饲料、化学品等方面都有了非常广泛的利用，特别是多肽产品对疾病的治疗，调节人体代谢以及预防疾病等方面的作用已越来越被人们青睐。那么，我们怎样从众多的生化产品中判断、鉴别多肽产品呢？唯一的办法就是通过检测。当今用于多肽检测的方法有许多，但主要有如下几项： （一）电泳技术 它是依据带电颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极移动，任何物质由于其本身的解离作用或表面上吸附其它带电质点，在电场中便会向一定的电极移动，作为带电颗粒可以是小的离子，也可是生物大分子，如蛋白质、核酸、病毒颗粒等。因多肽是由氨基酸组成的，而氨基酸带有可解离的氨基和羧基，是典型的两性电解质，在一定的pH条件下，就会解离而带电，带电多少取决于分子的性质及溶液的pH值和离子强度，不同的物质带电颗粒不同，在同一电场的运动速度不同，从而可将物质分开。 目前，用得较多的有SDS---聚丙烯酰胺凝胶电泳，等电聚焦电泳、双向电泳和印迹转移电泳等。 （二）层析技术 层析系统是由互不相溶的两组相组成，一个是固定相，另一个是流动相，利用物质物理化学性质上的差异(如吸附力，分子形状和大小 、分子极性、分子亲和力、分配系数等)，使各组分以不同浓度分布在两相中，它们以不同的速度移动，最终彼此分开。 根据固定相，流动相的不同可分为气相层析、液相层析、高效液相层析、薄层层析、离子交换层析、凝胶层析、亲和层析等。 由于组成多肽的氨基酸种类、排列方式不同，它们之间的结合力，分子大小也不同，通过层析可得到不同的多肽产物，达到鉴别多肽的目的。 （三）氨基酸的序列分析 多肽一般是由小于50个氨基酸残基按一定的顺序通过肽键连接成的物质，通过氨基酸序列分析，可知某一多肽是由几个氨基酸组成，从而证明它是一种什么肽，同时将切割下来的氨基酸与其它分离技术结合，可鉴定每次切割下来的氨基酸的性质，从而可区分不同的肽。 （四）高效液相色谱技术 高效液相色谱技术的鉴别是依据样品中各组分之间带电性、极性、疏水性、分子大小、等电点、亲和性等理化性质的差异而将不同的物质区分开来。检测中将样品导入柱头，流动相在高压泵的作用下，其样品被准确地通过色谱层析柱，样品中各组分在色谱柱中形成差速迁移，按时间的先后流出层析柱，从而进行检测，可判断是否为多肽物质。然后与标准分子量比较，可以确定肽类的分子量大小，以及不同分子量的分布。 多肽物质分子量检测技术随着分子生物学和生物技术的飞速发展，具有高生物活性的多肽类化合物的分离、纯化和分析已显得尤为突出。许多分离纯化和分析技术都是以分子量的大小为手段的，现将我们采用的几种主要的技术介绍如下： （一）凝胶过滤测定相对分子量该技术即凝胶过滤层析，也称分子排阻析或凝胶渗透。利用凝胶过滤可以把蛋白质多肽类混合物按分子量的大小分离出来。当不同分子大小的蛋白质多肽类混合物流经凝胶层析柱时，由于不同大小的分子所经路径不同而得到分离。大分子先被洗脱出来，小分子后被洗脱出来。该方法简单，不要求复杂的仪器就可较准确地测出蛋白质多肽的相对分子量。别外利用该技术测定Mr(相对分子量)还有一个优点，即待测物可以是不纯。该技术一般采用交联葡聚糖为基质，其商业名称为Sephadex。根据需要可选用SephadexG-25（分级分离的Mr范围5000以下）、SephadexG-75（Mr范围3000～80000）、SephadexG-100（Mr范围4000~50000）。实验时，以蛋白质标准的分子量对数值为纵座标、洗脱体积为横座标作标准曲线。根据待测品的洗脱体积从标准曲线上查出它的Mr。 （二）SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测相对分子量在聚丙烯酰胺凝胶电泳系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS)和少量巯基乙醇，蛋白质多肽类混合物的电泳迁移率将主要取决于它们的相对分子量，而与电荷和形状无关。目前，对于小分子多肽的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，选择合适的系统及合适的分离胶、浓缩胶甚至是间隙胶的浓度和交联度一直是人们研究的热点。另外应选择合适的蛋白质标准分子量范围，使得待测品的分子量能落在此范围内。实验测定时，以各种标准蛋白质的Mr的对数值为纵座标，其μR(相对迁移率)为横座标作标准曲线。根据待测品的μR从标准曲线上查出它们的Mr。 （三）高效凝胶排阻色谱（HPSEC）技术测相对分子量 HPSEC是一种基于分子筛原理与高速流动的流动相的层析分离方法，该技术快速、灵敏、高效。对于实验结果的外理与凝胶过滤一样。 固定相的孔径大小及流动相速度直接影响分离效果。固定相原材料 主要有Sw和 Pw两种，但一般情况下，仍首先考虑采用Sw型。主要规格有TSK-2000Sw(适合于5000～10000的蛋白多肽)、TSK-4000Sw（适合50000～1000000）等。流动相一般为缓冲液（常用磷酸或醋酸缓冲液），也可含有机溶剂（甲醇或乙腈）和变性剂（尿素、胍、SDS）。 以上简要介绍了多肽类分子量测定的几种常用技术。随着科学技术水平的不断发展，会有许多新的技术不断涌现，因此这一领域的研究具有广阔的前景。