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主题:多肽的基本常识
zhang发表于 2010-12-03 22:29
保存:  大多肽在-20℃很稳定,特别是冷冻干燥并保存在干燥器中,在将它们暴露于空气之前, 冷冻干燥多肽可以放于室温。这将是湿度影响减少,当无法冷冻干燥时,最好的方法是以小的工作样量存放。   对于含Cys, Met orTrP的多肽,脱氧缓冲剂对其溶解必不可少,因为这种多肽可易空气氧化, 在封瓶前,慢慢流过多肽的氮气或氩气也会降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解,所有这些肽与不含这些有问题解苷的那些肽相比,生命期有限。 溶解性:  大多肽的道选溶剂是超纯抽气水。稀乙酸或氨水分别对于碱性或酸性多肽的溶解很重要。这些方法不溶的多肽, 需要DMF、脲、guanidiniam chloride或acetonitnle来溶解,这些溶剂可能某些实验有副作用。所以我们建议设计多肽时要加注意。  残基Ala, Cys , Ile, Leu, Met, Phe和Val将全增加多肽的溶解难度。    多肽的保存和操做  包装 1mg或更少的多肽按净重包装,声明的小瓶重不含相关抗离子和水。 例如,氨基酸分析决定的肽含量是80%, 在1mg样品中,那么瓶中毛重是1.25mg。  大量的多肽以毛重算。标出的重量含相关抗离子和水, 例如,25mg样品中肽百分比为90%,那么,实际肽量为25mg×90%=22.5mg  不要把肽含量和纯度搞混了。肽的纯度可能是100%, 而肽含量相关带电基团(如Arg, Lys )的抗离子量和肽新水性决定。这是合成肽的本身特性。冻干肽的保存  所有产品应存于冰箱, 最好为-20℃。多数肽以此方法可以存放几年不变。肽溶液的保存  溶液肽远比冻干形式不稳定,溶液应为中性pH(pH5-7), -20℃保存的,为避免样品的反复冻融, 最好分成小样存放。一份样品融冻后未用完, 应扔掉,细菌降解有时会成为溶液肽的麻烦, 为克服此,肽应溶于无菌水, 或肽溶液用0.2μ M滤膜过滤。多肽的重建和操作  多数肽溶于无菌蒸溜水。初次溶解时,要注意使初始浓度比要求浓度大,如果多肽仅有限溶解性, 这便允许加入其它溶解剂或缓冲盐。  如果多肽在水中的溶解性有限,有几种选择可帮助溶解:  对碱性肽用稀乙酸(含Arg , Lys , His)  酸性肽用稀氨水(含Asp, Glu)  对极疏水的肽用10%有机修饰物(Acetonitnile , Methanol)  极不溶的肽用DM50或DMF  guanicline hydrochloride或脲的浓溶液也很有用, 与上述方法合用, 声处理也是溶解多肽的有效手段。多肽的包装  目录中所有多肽除特别说明外,纯度为95~98%。包装为小瓶冻干粉。 除特别注明外,多肽净重包装, 例如,1mg瓶的β-amyloid 1-40精确含1mg的多肽。多肽净重由氨基酸分析得到的肽含量计算。例如, 一个多肽样品毛重5mg,氨基酸含量85%, 多肽净重为5mg×0.85=4.25mg。请注意, 多肽含量不是多肽纯度,与抗离子象乙酸盐和溶剂,特别是水结合量合成多肽的本身特性。多肽纯度可能达100%, 但合成品中多肽含量由氨基酸组成,硫水性, 和多肽对溶剂和离子的暴露决定,特别是在纯化过程中, 无论多肽如何纯,冻干粉多肽含量一般为70-85%。 剩余15-30%由其它基本非肽成份构成。多肽应用和保存  多肽具广泛的溶解性。多肽不溶的主要问题是形成二级结构。除了最太肽外,这点都会发生, 在有多重疏水残基的肽中更显著。盐会促进二级结构形成。我们建议先在无菌蒸馏水或去离子中溶解多肽。如需要增加溶解率, 可用声处理。溶解仍有问题, 加少量稀乙酸(10%)或氨水,会便于溶解。  要长期保存多肽, 最好冷冻干燥,冷干粉可在-20℃或更低存放几年而很少或
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